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布病的檢測(cè)方法
布病的檢測(cè)方法
虎紅平板凝集試驗(yàn)(RBPT):
實(shí)驗(yàn)原理:該試驗(yàn)又稱為板式孟加拉紅平板凝集實(shí)驗(yàn)。由于所用的抗原是酸性(PH3.6—3.9)帶色的抗原,該抗原與被檢血清作用時(shí)能抑制血清中的IgM類抗體的凝集活性,檢查出的抗體是IgG類,因此提高了該項(xiàng)反應(yīng)的特異性。 器材與試劑:虎紅平板凝集抗原、載玻片、移液器、槍頭
方法:在載玻片上加抗原30μl,加入30μl被檢血清,混勻。在5min內(nèi)觀察結(jié)果,輕搖載玻片,出現(xiàn)凝集顆粒為陽(yáng)性,否則為陰性。
試管凝集試驗(yàn)(SAT):
實(shí)驗(yàn)原理:布魯氏菌侵入機(jī)體后,會(huì)刺激機(jī)體產(chǎn)生特異性抗體,這種抗體可與相應(yīng)的布氏菌抗原發(fā)生特異性結(jié)合,在電介質(zhì)作用下,就會(huì)形成肉眼可見(jiàn)的凝集反應(yīng),也就是用已知抗原查未知抗體。
器材與試劑:布病試管凝集抗原、生理鹽水、試管、移液管、移液器、小燒杯、槍頭、試管架
方法:1.準(zhǔn)備試管:取9支試管放在試管架中編號(hào)。1號(hào)管為血清對(duì)照管,2—8號(hào)為試驗(yàn)管,9號(hào)為抗原對(duì)照管。
2.血清稀釋:1號(hào)管加入2.3ml生理鹽水,2號(hào)不加,3號(hào)—9號(hào)各加入0.5ml生理鹽水。1號(hào)管加入0.2ml被檢血清,混勻后各吸0.5ml加入2、3號(hào)管。從3號(hào)開(kāi)始做倍比稀釋,8號(hào)吸0.5ml棄去。
3.加入抗原:10倍稀釋抗原(用燒杯,1ml抗原9ml生理鹽水),從2號(hào)開(kāi)始每支加0.5ml稀釋后抗原,從2號(hào)開(kāi)始,血清被稀釋濃度為1:25、1:50、1:100、1:200、1:400、1:800、1:1600
4.凝集試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)比濁管的配制(判定透明程度的依據(jù)):取5支試管,編號(hào),取稀釋后的抗原再做2倍稀釋。
管號(hào) 抗原稀釋液鹽水(ml) 清亮度 標(biāo)記
(ml)
1 0.00 1.00 100% ++++ 2 0.25 0.75 75% +++ 3 0.50 0.50 50% ++
4 0.75 0.25 25% +
5 1.00 0.00 0% —
充分混勻,將所有試管放入溫箱中37℃培養(yǎng)20—22小時(shí)取出,在室溫下放置1—2小時(shí)后觀察結(jié)果。
5.結(jié)果判定:1號(hào)管清亮透明,9號(hào)管均勻渾濁(對(duì)比)
假如試驗(yàn)管包括6號(hào)之前都透明,取出6號(hào)管比較,若其與2號(hào)比較管相近,則被檢血清結(jié)果為1:400,+++
牛血清凝集價(jià)在1:100以上時(shí),該血清樣品為布病陽(yáng)性,血清凝集價(jià)在1:50時(shí),該血清樣品為疑似反應(yīng),經(jīng)3—4周后須再做一次檢查,扔為疑似反應(yīng)者判為陽(yáng)性,凝集價(jià)在1:50以下則為陰性反應(yīng)。
羊和豬血清在1:25凝集為可疑,在1:50或以上凝集為陽(yáng)性。
總結(jié):RBPT在使用時(shí)操作方便、快捷,適用于大規(guī)模的篩選檢疫,但易出現(xiàn)假陽(yáng)性。SAT特異性高,檢測(cè)比較準(zhǔn)確,但操作麻煩,費(fèi)時(shí)費(fèi)力,不適用于大規(guī)模的篩選檢測(cè),不能區(qū)分人工**和自然感染。先用RBPT篩選,陽(yáng)性樣品再用SAT復(fù)核以做出比較準(zhǔn)確的判斷。
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