1 天氣陰時(shí)測(cè)定光合速率
這是*常見的使用錯(cuò)誤，很多用戶在打電話咨詢說光合儀數(shù)值穩(wěn)定過程非常慢或者測(cè)定的光合數(shù)據(jù)很低，排除很多因素之后，*后一問原來是當(dāng)?shù)仃幪臁?/span>
陰天測(cè)定光合速率為啥穩(wěn)定特別慢（一般要10分鐘以上），而且測(cè)得的光合數(shù)值往往非常低呢？
光合作用分為光反應(yīng)和暗反應(yīng)兩個(gè)過程，光反應(yīng)是從葉綠素吸收光能到光能轉(zhuǎn)換為電能，經(jīng)過電子傳遞后將電能傳遞到NADP+，生成NADPH同時(shí)也會(huì)生成ATP，將電能轉(zhuǎn)換為活躍的化學(xué)能的過程，這個(gè)過程相對(duì)比較快。暗反應(yīng)是將光反應(yīng)產(chǎn)生的NADPH和ATP經(jīng)過卡爾文循環(huán)，將活躍的化學(xué)能轉(zhuǎn)化為穩(wěn)定的化學(xué)能的過程。而卡爾文循環(huán)中得很多酶需要在光下一段時(shí)間（10分鐘以上）才有活性，如RUBP羧化酶等。
因此在陰天時(shí)，由于外界的光強(qiáng)比較低不能有效的激活卡爾文循環(huán)中相關(guān)酶的活性。所以測(cè)定的光合數(shù)據(jù)往往比較低。就算是在儀器自身光源的照射下，也要一段時(shí)間（10分鐘以上）光合速率值才能穩(wěn)定，酶的活性需要類囊體腔內(nèi)的H+濃度積累到一定程度才能激活。然后通過磷酸化或去磷酸化的過程，這個(gè)過程需要一段時(shí)間。因此在陰天測(cè)定光合速率時(shí)往往光合數(shù)值穩(wěn)定的非常慢
常有客戶說，我的實(shí)驗(yàn)需要測(cè)定光合的時(shí)候正好趕上陰天，我還必須要測(cè)定光合速率怎么辦？
首先說建議不要陰天時(shí)測(cè)定光合數(shù)據(jù)，如果非要測(cè)定有以下幾種情況
有時(shí)可以合理安排實(shí)驗(yàn)的避開陰天。
比如實(shí)驗(yàn)：花后每隔一周檢測(cè)一次光合速率的變化，以匯出光合速率在開花之后的變化曲線。
這樣的實(shí)驗(yàn)不需要嚴(yán)格的按照實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)中設(shè)定的日期測(cè)定光合速率，比如需要在5月30日測(cè)定這**的光合速率，提前看天氣預(yù)報(bào)，如果這天預(yù)報(bào)有雨，那可以在5月31日測(cè)定也完全可以，如果31日也是陰天可以選擇29日測(cè)定，不需要很恪守圓規(guī)。
有些室內(nèi)的實(shí)驗(yàn)在陰天時(shí)候可以給予人工光源的照射，測(cè)定前1小時(shí)將被測(cè)定的材料置于人工光源下（人工光源的強(qiáng)度需要在800umol/m-2/s-1以上），讓酶的活性充分被激活。然后正常進(jìn)行測(cè)定即可。
對(duì)于室外的實(shí)驗(yàn)如果陰天非要測(cè)定，則每個(gè)被測(cè)樣品需要在儀器的光源下穩(wěn)20分鐘后等數(shù)據(jù)穩(wěn)定后讀數(shù)，但是對(duì)于需要測(cè)定大量樣品的實(shí)驗(yàn)就不能測(cè)定了。
雖然以上三種辦法可以在一定程度上解決陰天測(cè)定光合數(shù)據(jù)的情況，然而陰天時(shí)光合速率不僅僅受到光照的影響，濕度，溫度也會(huì)在一定程度上影響光合速率。在陰天溫度，濕度和正常天氣相似時(shí)對(duì)光合影響不大，如果濕度很大時(shí)會(huì)影響氣孔導(dǎo)度，進(jìn)而影響光合速率。因此建議能避開盡量避開。
下雨天一定不能測(cè)定，光合儀是嚴(yán)格不能進(jìn)水的，不論什么光合儀只要有液態(tài)水進(jìn)入光合儀，一定會(huì)受到*嚴(yán)重的損壞，這種損壞是不可修復(fù)的，只能更換*貴的部件。
2 外界CO2濃度變化非常大時(shí)測(cè)定或者CO2濃度不穩(wěn)定時(shí)測(cè)定
CO2是光合作用的反應(yīng)底物，改變底物濃度就會(huì)影響反應(yīng)速率。因此穩(wěn)定的CO2濃度是測(cè)定穩(wěn)定光合速率的必要前提。CO2波動(dòng)時(shí)測(cè)定光合數(shù)據(jù)一定是錯(cuò)誤的，就像是做液相色譜，基線都不穩(wěn)，測(cè)定的數(shù)據(jù)沒有意義一樣。
提供穩(wěn)定的CO2濃度有兩種方法，一是儀器自帶的鋼瓶供氣，二是緩沖瓶供氣
對(duì)于使用鋼瓶供氣一般限于**的光合儀如CIRAS-2，Li-6400等。使用鋼瓶供氣能夠提供穩(wěn)定的CO2進(jìn)氣。缺點(diǎn)是鋼瓶價(jià)格相對(duì)較高高。然而部分光合儀因?yàn)闆]有CO2氣瓶，因此只能用緩沖瓶供CO2。
不用緩沖瓶直接測(cè)定是常見的錯(cuò)誤之一
很多使用者在使用的時(shí)候不了解緩沖瓶的原理，認(rèn)為大氣CO2是相對(duì)穩(wěn)定的一般在370-410ppm之間，因此可以不用緩沖瓶。然而在實(shí)驗(yàn)的過程中由于人在儀器旁邊操作，人的呼吸會(huì)造成儀器周圍CO2濃度的波動(dòng)。緩沖瓶的原理就是起到CO2濃度緩沖的作用，即使周圍環(huán)境CO2濃度發(fā)生較大變化也不會(huì)造成緩沖瓶內(nèi)CO2氣體的大幅度波動(dòng)。
正確的測(cè)定是進(jìn)氣口的CO2濃度波動(dòng)不能超過0.2-0.5ppm，否則測(cè)定的數(shù)據(jù)是不穩(wěn)定的。
3 下午進(jìn)行光合速率的測(cè)定
首先要明確除非是測(cè)定光合作用日變化曲線，否則不要下午進(jìn)行光合速率的測(cè)定。
經(jīng)常有用戶下午打電話咨詢說光合數(shù)據(jù)非常低，問后才知不是測(cè)定光合作用的日變化。下午測(cè)定光合數(shù)據(jù)往往比較低，原因如下：
經(jīng)過中午的強(qiáng)光，高溫，葉片往往受到光抑制，光抑制主要表現(xiàn)是強(qiáng)光下植物光化學(xué)效率的降低，一般用熒光參數(shù)Fv/Fm反映。光合也會(huì)受到抑制，光合能力下調(diào)；
中午的強(qiáng)光，高溫會(huì)誘導(dǎo)氣孔的關(guān)閉，氣孔關(guān)閉后通過氣孔限制抑制光合作用；
很多葉片的氣孔具有明顯的節(jié)律性，氣孔節(jié)律性的關(guān)閉也可以抑制光合能力。
4 測(cè)定光合時(shí)沒有對(duì)被測(cè)材料進(jìn)行篩選
這種錯(cuò)誤經(jīng)常見，尤其是一些轉(zhuǎn)基因材料，由于基因插入位點(diǎn)不同，本身材料和材料之間差異就非常大，這樣測(cè)定光合數(shù)據(jù)往往重復(fù)性很差，或者不能測(cè)定出理想的數(shù)據(jù)。測(cè)定光合作用不同于測(cè)定基因的存在與否，測(cè)定基因是否存在，是一個(gè)檢測(cè)有無的實(shí)驗(yàn)，只要植物存在這個(gè)基因不管生長差異多大，都可以測(cè)定出來，而測(cè)定光合數(shù)據(jù)，是一個(gè)受材料本身和環(huán)境因子影響極大的實(shí)驗(yàn)。需要選擇生長一致的材料進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
光合參數(shù)和植物生長的狀況顯著相關(guān)，因此測(cè)定光合數(shù)據(jù)的時(shí)候要首先選擇生長一致的材料進(jìn)行測(cè)定或者處理前就要選擇生長一致的材料。自然界廣泛存在正態(tài)分布現(xiàn)象，即使是在相同的環(huán)境中生長的材料本身也存在著差異。因此在測(cè)定光合的時(shí)候選擇生長一致的材料特別重要。忽略材料之間的差異在測(cè)定的時(shí)候會(huì)出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)差很大，重復(fù)性不好的現(xiàn)象，更有甚者會(huì)導(dǎo)致數(shù)據(jù)出現(xiàn)錯(cuò)誤。
除了要選擇生長一致的材料外，還需要選擇相同的葉位，角度，朝向一致的葉片進(jìn)行測(cè)定才有意義。
5 用熒光數(shù)據(jù)直接代替光合數(shù)據(jù)
由于光合數(shù)據(jù)測(cè)定時(shí)需要注意的問題很多，而且測(cè)定速度相對(duì)比較慢，而熒光數(shù)據(jù)測(cè)定迅速，重復(fù)性相對(duì)比較好，再加上很多人的誤導(dǎo)，結(jié)果導(dǎo)致很多初學(xué)者喜歡用熒光數(shù)據(jù)來代替光合數(shù)據(jù)，甚至用熒光參數(shù)直接代替光合數(shù)據(jù)。雖然在非逆境條件下，有熒光參數(shù)和光合數(shù)據(jù)是成正相關(guān)的關(guān)系，可是我們也不能用熒光參數(shù)來代替光合數(shù)據(jù)使用。光合數(shù)據(jù)是*直接的反映植物生長的數(shù)據(jù)，熒光數(shù)據(jù)是為了進(jìn)一步解釋和說明光合數(shù)據(jù)的，解釋和說明光合變化原因的，如果離開了光合單獨(dú)談熒光，就失去了熒光的意義。