1 天氣陰時測定光合速率

這是*常見的使用錯誤，很多用戶在打電話咨詢說光合儀數(shù)值穩(wěn)定過程非常慢或者測定的光合數(shù)據(jù)很低，排除很多因素之后，*后一問原來是當?shù)仃幪臁?/span>

陰天測定光合速率為啥穩(wěn)定特別慢（一般要10分鐘以上），而且測得的光合數(shù)值往往非常低呢？

光合作用分為光反應和暗反應兩個過程，光反應是從葉綠素吸收光能到光能轉換為電能，經(jīng)過電子傳遞后將電能傳遞到NADP+，生成NADPH同時也會生成ATP，將電能轉換為活躍的化學能的過程，這個過程相對比較快。暗反應是將光反應產(chǎn)生的NADPH和ATP經(jīng)過卡爾文循環(huán)，將活躍的化學能轉化為穩(wěn)定的化學能的過程。而卡爾文循環(huán)中得很多酶需要在光下一段時間（10分鐘以上）才有活性，如RUBP羧化酶等。

因此在陰天時，由于外界的光強比較低不能有效的激活卡爾文循環(huán)中相關酶的活性。所以測定的光合數(shù)據(jù)往往比較低。就算是在儀器自身光源的照射下，也要一段時間（10分鐘以上）光合速率值才能穩(wěn)定，酶的活性需要類囊體腔內的H+濃度積累到一定程度才能激活。然后通過磷酸化或去磷酸化的過程，這個過程需要一段時間。因此在陰天測定光合速率時往往光合數(shù)值穩(wěn)定的非常慢

常有客戶說，我的實驗需要測定光合的時候正好趕上陰天，我還必須要測定光合速率怎么辦？

首先說建議不要陰天時測定光合數(shù)據(jù)，如果非要測定有以下幾種情況

有時可以合理安排實驗的避開陰天。

比如實驗：花后每隔一周檢測一次光合速率的變化，以匯出光合速率在開花之后的變化曲線。

這樣的實驗不需要嚴格的按照實驗設計中設定的日期測定光合速率，比如需要在5月30日測定這**的光合速率，提前看天氣預報，如果這天預報有雨，那可以在5月31日測定也完全可以，如果31日也是陰天可以選擇29日測定，不需要很恪守圓規(guī)。

有些室內的實驗在陰天時候可以給予人工光源的照射，測定前1小時將被測定的材料置于人工光源下（人工光源的強度需要在800umol/m-2/s-1以上），讓酶的活性充分被激活。然后正常進行測定即可。

對于室外的實驗如果陰天非要測定，則每個被測樣品需要在儀器的光源下穩(wěn)20分鐘后等數(shù)據(jù)穩(wěn)定后讀數(shù)，但是對于需要測定大量樣品的實驗就不能測定了。

雖然以上三種辦法可以在一定程度上解決陰天測定光合數(shù)據(jù)的情況，然而陰天時光合速率不僅僅受到光照的影響，濕度，溫度也會在一定程度上影響光合速率。在陰天溫度，濕度和正常天氣相似時對光合影響不大，如果濕度很大時會影響氣孔導度，進而影響光合速率。因此建議能避開盡量避開。

下雨天一定不能測定，光合儀是嚴格不能進水的，不論什么光合儀只要有液態(tài)水進入光合儀，一定會受到*嚴重的損壞，這種損壞是不可修復的，只能更換*貴的部件。

2 外界CO2濃度變化非常大時測定或者CO2濃度不穩(wěn)定時測定

CO2是光合作用的反應底物，改變底物濃度就會影響反應速率。因此穩(wěn)定的CO2濃度是測定穩(wěn)定光合速率的必要前提。CO2波動時測定光合數(shù)據(jù)一定是錯誤的，就像是做液相色譜，基線都不穩(wěn)，測定的數(shù)據(jù)沒有意義一樣。

提供穩(wěn)定的CO2濃度有兩種方法，一是儀器自帶的鋼瓶供氣，二是緩沖瓶供氣

對于使用鋼瓶供氣一般限于**的光合儀如CIRAS-2，Li-6400等。使用鋼瓶供氣能夠提供穩(wěn)定的CO2進氣。缺點是鋼瓶價格相對較高高。然而部分光合儀因為沒有CO2氣瓶，因此只能用緩沖瓶供CO2。

不用緩沖瓶直接測定是常見的錯誤之一

很多使用者在使用的時候不了解緩沖瓶的原理，認為大氣CO2是相對穩(wěn)定的一般在370-410ppm之間，因此可以不用緩沖瓶。然而在實驗的過程中由于人在儀器旁邊操作，人的呼吸會造成儀器周圍CO2濃度的波動。緩沖瓶的原理就是起到CO2濃度緩沖的作用，即使周圍環(huán)境CO2濃度發(fā)生較大變化也不會造成緩沖瓶內CO2氣體的大幅度波動。

正確的測定是進氣口的CO2濃度波動不能超過0.2-0.5ppm，否則測定的數(shù)據(jù)是不穩(wěn)定的。

3 下午進行光合速率的測定

首先要明確除非是測定光合作用日變化曲線，否則不要下午進行光合速率的測定。

經(jīng)常有用戶下午打電話咨詢說光合數(shù)據(jù)非常低，問后才知不是測定光合作用的日變化。下午測定光合數(shù)據(jù)往往比較低，原因如下：

經(jīng)過中午的強光，高溫，葉片往往受到光抑制，光抑制主要表現(xiàn)是強光下植物光化學效率的降低，一般用熒光參數(shù)Fv/Fm反映。光合也會受到抑制，光合能力下調；

中午的強光，高溫會誘導氣孔的關閉，氣孔關閉后通過氣孔限制抑制光合作用；

很多葉片的氣孔具有明顯的節(jié)律性，氣孔節(jié)律性的關閉也可以抑制光合能力。

4 測定光合時沒有對被測材料進行篩選

這種錯誤經(jīng)常見，尤其是一些轉基因材料，由于基因插入位點不同，本身材料和材料之間差異就非常大，這樣測定光合數(shù)據(jù)往往重復性很差，或者不能測定出理想的數(shù)據(jù)。測定光合作用不同于測定基因的存在與否，測定基因是否存在，是一個檢測有無的實驗，只要植物存在這個基因不管生長差異多大，都可以測定出來，而測定光合數(shù)據(jù)，是一個受材料本身和環(huán)境因子影響極大的實驗。需要選擇生長一致的材料進行實驗。

光合參數(shù)和植物生長的狀況顯著相關，因此測定光合數(shù)據(jù)的時候要首先選擇生長一致的材料進行測定或者處理前就要選擇生長一致的材料。自然界廣泛存在正態(tài)分布現(xiàn)象，即使是在相同的環(huán)境中生長的材料本身也存在著差異。因此在測定光合的時候選擇生長一致的材料特別重要。忽略材料之間的差異在測定的時候會出現(xiàn)標準差很大，重復性不好的現(xiàn)象，更有甚者會導致數(shù)據(jù)出現(xiàn)錯誤。

除了要選擇生長一致的材料外，還需要選擇相同的葉位，角度，朝向一致的葉片進行測定才有意義。

5 用熒光數(shù)據(jù)直接代替光合數(shù)據(jù)

由于光合數(shù)據(jù)測定時需要注意的問題很多，而且測定速度相對比較慢，而熒光數(shù)據(jù)測定迅速，重復性相對比較好，再加上很多人的誤導，結果導致很多初學者喜歡用熒光數(shù)據(jù)來代替光合數(shù)據(jù)，甚至用熒光參數(shù)直接代替光合數(shù)據(jù)。雖然在非逆境條件下，有熒光參數(shù)和光合數(shù)據(jù)是成正相關的關系，可是我們也不能用熒光參數(shù)來代替光合數(shù)據(jù)使用。光合數(shù)據(jù)是*直接的反映植物生長的數(shù)據(jù)，熒光數(shù)據(jù)是為了進一步解釋和說明光合數(shù)據(jù)的，解釋和說明光合變化原因的，如果離開了光合單獨談熒光，就失去了熒光的意義。